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厭氧培養箱實驗操作流程

更新時間:2016-04-06 點擊量:1449
厭氧培養箱是一種在無氧環境條件下進行細菌培養及操作的裝置。它能提供嚴格的厭氧狀態恒定的溫度培養條件和具有一個系統化、科學化的工作區域。厭氧培養箱操作培養,可以培養zui難生長的厭氧生物,又能避免以往厭氧生物在大氣中操作時接觸氧而死亡的危險性。因此厭氧培養箱是厭氧生物檢測科研的理想工具。厭氧培養箱也是一物多用的良好儀器,如改變操作方法,為微需氧菌的生長繁殖提供良好的生長條件。 
厭氧培養箱的操作規程
 (一)操作室厭氧環境形成:
  1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;
  2. 通電源開照明燈,開溫控儀,調節所需溫度;
  3. 操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示紙(封閉);
  4. 關緊取樣室內外門,并抽真空校驗;
  5. 操作室內*次置換(氮氣置換):
  A. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊
  B. 接通氮氣進氣路,打開氮氣控制閥1,使手套鼓起,關閉閥門1,然后扎緊袋口;
  6. 操作室第二次置換(氮氣置換)重復一次充氮過程,取樣室先抽真空,并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。如此連續三次氮氣置換。
  7. 操作室第四次置換(混合氣體置換):
  (混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
  A. 調換氣路打開混合氣閥3進氣,充氣時取樣室先抽真空,并隨時用腳踏開關開閉排氣;
  B. 關掉混合氣體閥3,并打開閥5,使混合氣體經過流量計,調整流量計,流量為每分鐘10ml左右;
  C. 混合氣體重復2-3次轉換,經過上述過程,基本形成厭氧環境。
  8. 操作室內打開粑粒除氧劑,接通除氧催化器電源進行催化除氧,一小時后打開美蘭指示紙觀察其變色情況,不變色為操作室內達到厭氧環境;
  9. 開紫外線滅菌燈,室內進行滅菌處理,滅菌時間按具體實驗自定。
  (二)菌種的置入和培養:
  1. 檢查取樣室內門并關緊;
  2. 打開取樣室外門,將菌種放入取樣室后即關上外門;
  3. 取樣室充氮置換三次過程:打開真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打開氮氣閥2進氣,使指針回復零位,關掉閥2。第二次重復操作一次。第三次操作時,使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打開閥4進混合氣,使指針回復零位,關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束;
  4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數;
  5. 取樣室外門開啟、關緊,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗;
  6. 厭氧培養箱需要長期連續使用的條件:
  A. 每天在操作室內打開美蘭指示紙觀察,如不正常就必須重新換氣;
  B. 要長期連續輸入微量的混合氣體,使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收,保證室內厭氧狀態,補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
  C. 連續培養運行一天,更換一次除氧劑和干燥劑。
  D. 操作室內溫度可任意選擇和控制。
  7. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整:調節減壓閥,使輸出壓力0.1Mpa左右。
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